जैव प्रौद्योगिकी - सिद्धांत और प्रक्रियाएं - भाग 5

PCR (पॉलिमरेज चेन रिएक्शन):

PCR एक आणविक जीवविज्ञान तकनीक है जिसका उपयोग किसी विशिष्ट DNA खंड को प्रवर्धित करने के लिए किया जाता है।

इसका उपयोग चिकित्सा निदान, आनुवंशिकी और फॉरेंसिक्स में किया जाता है।

इसमें DNA का इन विट्रो में पुनरावृत्ति होता है, जिससे लक्ष्य DNA की लाखों प्रतियाँ बनती हैं।

DNA संश्लेषण:

DNA संश्लेषण एक टेम्पलेट के पूरक DNA स्ट्रैंड का निर्माण करता है।

DNA प्रतिकृतिकरण और PCR के लिए आवश्यक है।

DNA पॉलिमरेज न्यूक्लियोटाइड बिल्डिंग ब्लॉक्स से एक नया DNA स्ट्रैंड संश्लेषित करता है।

PCR के लिए आवश्यकताएँ:

मुख्य घटक: DNA टेम्पलेट, प्राइमर, न्यूक्लियोटाइड्स (A, T, C, G), DNA पॉलिमरेज (जैसे Taq पॉलिमरेज)।

Taq पॉलिमरेज उच्च PCR तापमान को सहन कर सकता है।

PCR चरण:

1. विकृतिकरण: उच्च तापमान DNA स्ट्रैंड्स को अलग करता है।

2. एनीलिंग: प्राइमर बाइंडिंग के लिए कम तापमान।

3. विस्तार: थोड़ा तापमान वृद्धि; प्राइमर से DNA संश्लेषण। चक्रों को घातीय लक्ष्य DNA प्रवर्धन के लिए दोहराया जाता है।

उपकरण: थर्मल साइकलर:

PCR में सटीक तापमान परिवर्तनों को स्वचालित करता है।

विकृतिकरण, एनीलिंग और विस्तार के लिए बार-बार हीटिंग और कूलिंग।

PCR प्रतिक्रिया का विश्लेषण:

PCR के बाद DNA खंडों का विश्लेषण किया जाता है।

तकनीकें जैसे एगरोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग किया जाता है।

आकार के अनुसार DNA खंडों को अलग करता है; लक्ष्य की उपस्थिति और आकार की पुष्टि करता है।

विस्तृत विश्लेषण के लिए फ्लोरोसेंट डाई या DNA अनुक्रमण।

प्रतिबंधन पाचन और लिगेशन:

प्रतिबंधन पाचन एंजाइमों का उपयोग करके विशिष्ट स्थलों पर DNA को काटता है।

लिगेशन DNA लिगेज के साथ DNA खंडों को जोड़ता है।

मॉलिक्यूलर क्लोनिंग में उपयोग किया जाता है ताकि लक्ष्य DNA को विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए वेक्टरों में डाला जा सके।