जैवतंत्रज्ञान हे सजीव सूक्ष्मजीव किंवा सूक्ष्मजीवांपासून मिळणाऱ्या एन्झाइम्सचा वापर करून मानवांसाठी उपयुक्त असे उत्पादने आणि प्रक्रिया तयार करण्याच्या तंत्रांशी संबंधित आहे. या अर्थाने, दही, भाकरी किंवा दारू बनवणे, जी सर्व सूक्ष्मजीव-मध्यस्थीत प्रक्रिया आहेत, त्या देखील जैवतंत्रज्ञानाचा एक प्रकार म्हणून विचारात घेतल्या जाऊ शकतात. तथापि, आजकाल ते एका मर्यादित अर्थाने वापरले जाते, जेणेकरून अशा प्रक्रियांचा संदर्भ घेतला जाईल ज्यात आनुवंशिकदृष्ट्या सुधारित सजीवांचा वापर करून मोठ्या प्रमाणात तेच साध्य केले जाते. याशिवाय, जैवतंत्रज्ञानाच्या अंतर्गत इतर अनेक प्रक्रिया/तंत्रे देखील समाविष्ट केली जातात. उदाहरणार्थ, इन विट्रो फर्टिलायझेशनमुळे ‘टेस्ट-ट्यूब’ बाळ होणे, जनुक संश्लेषण करून त्याचा वापर करणे, डीएनए लस विकसित करणे किंवा दोषयुक्त जनुक दुरुस्त करणे हे सर्व जैवतंत्रज्ञानाचा भाग आहेत.

युरोपियन फेडरेशन ऑफ बायोटेक्नॉलॉजी (EFB) ने जैवतंत्रज्ञानाची एक व्याख्या दिली आहे ज्यामध्ये पारंपारिक दृष्टिकोन आणि आधुनिक आण्विक जैवतंत्रज्ञान दोन्ही समाविष्ट आहेत. EFB द्वारे दिलेली व्याख्या खालीलप्रमाणे आहे: ‘उत्पादने आणि सेवांसाठी नैसर्गिक विज्ञान आणि सजीव, पेशी, त्यांचे भाग आणि आण्विक साधर्म्य यांचे एकत्रीकरण’.

11.1 जैवतंत्रज्ञानाची तत्त्वे

अनेकांमध्ये, आधुनिक जैवतंत्रज्ञानाचा जन्म शक्य करणारी दोन मुख्य तंत्रे आहेत:

(i) आनुवंशिक अभियांत्रिकी : आनुवंशिक सामग्रीचे (DNA आणि RNA) रसायनशास्त्र बदलण्यासाठी, त्यांना यजमान सजीवांमध्ये सादर करण्यासाठी आणि अशाप्रकारे यजमान सजीवाचे फेनोटाइप बदलण्यासाठीची तंत्रे.

(ii) जैवप्रक्रिया अभियांत्रिकी : रासायनिक अभियांत्रिकी प्रक्रियांमध्ये निर्जंतुक (सूक्ष्मजीव संसर्ग-मुक्त) वातावरण राखणे जेणेकरून प्रतिजैविक, लसी, एन्झाइम्स इत्यादी जैवतांत्रिक उत्पादनांच्या निर्मितीसाठी केवळ इच्छित सूक्ष्मजीव/युकेरियोटिक पेशी मोठ्या प्रमाणात वाढू शकतील.

आता आनुवंशिक अभियांत्रिकीच्या तत्त्वांच्या संकल्पनात्मक विकासाचा विचार करूया. तुम्ही कदाचित अलैंगिक प्रजननापेक्षा लैंगिक प्रजननाचे फायदे जाणता. पूर्वीचे आनुवंशिक रचनेचे अद्वितीय संयोजन तयार करण्यासाठी आणि भिन्नता निर्माण करण्यासाठी संधी प्रदान करते, त्यापैकी काही सजीव आणि समुदायासाठी फायदेशीर ठरू शकतात. अलैंगिक प्रजनन आनुवंशिक माहिती जपते, तर लैंगिक प्रजनन भिन्नता परवानगी देते. वनस्पती आणि प्राण्यांच्या प्रजननात वापरल्या जाणाऱ्या पारंपारिक संकरीकरण प्रक्रियामुळे, बऱ्याचदा इच्छित जनुकांसोबत अवांछित जनुकांचा समावेश आणि गुणाकार होतो. पुनर्योगज DNA ची निर्मिती, जनुक क्लोनिंग आणि जनुक हस्तांतरणाचा वापर यांचा समावेश असलेल्या आनुवंशिक अभियांत्रिकीची तंत्रे ही मर्यादा दूर करतात आणि लक्ष्य सजीवामध्ये अवांछित जनुक न आणता केवळ एक किंवा इच्छित जनुकांचा संच वेगळा करून आणण्यास परवानगी देतात.

तुम्हाला माहिती आहे का की, DNA चा एक तुकडा जो कसातरी परकीय सजीवामध्ये हस्तांतरित केला गेला तर त्याचे काय होण्याची शक्यता आहे? बहुधा, हा DNA चा तुकडा सजीवाच्या संतती पेशींमध्ये स्वतःचा गुणाकार करण्यास सक्षम होणार नाही. परंतु, जेव्हा तो प्राप्तकर्त्याच्या जीनोममध्ये एकत्रित होतो, तेव्हा तो यजमान DNA सोबत गुणाकार होऊ शकतो आणि वारसाहक्काने मिळू शकतो. याचे कारण असे की परकीय DNA चा तुकडा गुणसूत्राचा भाग बनला आहे, ज्यामध्ये स्वतःची प्रतिकृती तयार करण्याची क्षमता आहे. गुणसूत्रामध्ये प्रतिकृतीचा उगम म्हणून ओळखली जाणारी एक विशिष्ट DNA क्रम आहे, जी प्रतिकृती सुरू करण्यासाठी जबाबदार असते. म्हणून, कोणत्याही परकीय DNA तुकड्याचा सजीवामध्ये गुणाकार करण्यासाठी, तो गुणसूत्राचा भाग असणे आवश्यक आहे ज्यामध्ये ‘प्रतिकृतीचा उगम’ म्हणून ओळखला जाणारा विशिष्ट क्रम असतो. अशाप्रकारे, एक परकीय DNA हा प्रतिकृतीच्या उगमाशी जोडला जातो, जेणेकरून हा परकीय DNA तुकडा यजमान सजीवामध्ये स्वतःची प्रतिकृती तयार करू शकेल आणि गुणाकार करू शकेल. याला क्लोनिंग किंवा कोणत्याही टेम्पलेट DNA च्या अनेक एकसारख्या प्रती तयार करणे असेही म्हणता येईल.

आता कृत्रिम पुनर्योगज DNA रेणूच्या बांधकामाच्या पहिल्या उदाहरणावर लक्ष केंद्रित करूया. पहिल्या पुनर्योगज DNA चे बांधकाम अँटिबायोटिक प्रतिरोधकता एन्कोड करणाऱ्या जनुकास साल्मोनेला टायफिम्युरियमच्या मूळ प्लाझमिड (स्वायत्तपणे प्रतिकृती तयार करणारे गोलाकार अतिरिक्त-गुणसूत्रीय DNA) शी जोडण्याच्या शक्यतेतून उद्भवले. स्टॅन्ली कोहेन आणि हर्बर्ट बॉयर यांनी 1972 मध्ये अँटिबायोटिक प्रतिरोधकता प्रदान करण्यासाठी जबाबदार असलेल्या प्लाझमिडमधून DNA चा तुकडा कापून अँटिबायोटिक प्रतिरोधक जनुक वेगळे करून हे साध्य केले. विशिष्ट ठिकाणी DNA कापणे तथाकथित ‘आण्विक कात्री’ – प्रतिबंधक एन्झाइम्सच्या शोधाने शक्य झाले. कापलेला DNA तुकडा नंतर प्लाझमिड DNA शी जोडला गेला. हे प्लाझमिड DNA वेक्टर म्हणून काम करतात जे त्यास जोडलेला DNA तुकडा हस्तांतरित करतात. तुम्हाला कदाचित माहित असेल की डास मलेरिया परजीवी मानवी शरीरात हस्तांतरित करण्यासाठी कीटक वेक्टर म्हणून काम करतो. त्याच प्रकारे, प्लाझमिडचा वापर यजमान सजीवामध्ये परकीय DNA तुकडा पोहोचवण्यासाठी वेक्टर म्हणून केला जाऊ शकतो. अँटिबायोटिक प्रतिरोधक जनुकास प्लाझमिड वेक्टरशी जोडणे DNA लायगेज एन्झाइमद्वारे शक्य झाले, जे कापलेल्या DNA रेणूंवर कार्य करते आणि त्यांचे टोक जोडते. हे इन विट्रोमध्ये तयार केलेल्या गोलाकार स्वायत्तपणे प्रतिकृती तयार करणाऱ्या DNA चे एक नवीन संयोजन बनवते आणि त्याला पुनर्योगज DNA म्हणून ओळखले जाते. जेव्हा हे DNA एस्चेरिचिया कोलायमध्ये, साल्मोनेलाशी जवळून संबंधित असलेल्या जीवाणूमध्ये हस्तांतरित केले जाते, तेव्हा ते नवीन यजमानाचे DNA पॉलिमरेज एन्झाइम वापरून प्रतिकृती तयार करू शकते आणि अनेक प्रती बनवू शकते. E. coli मध्ये अँटिबायोटिक प्रतिरोधक जनुकाच्या प्रती गुणाकार करण्याच्या क्षमतेला E. coli मध्ये अँटिबायोटिक प्रतिरोधक जनुकाचे क्लोनिंग असे म्हटले गेले.

म्हणून तुम्ही असा निष्कर्ष काढू शकता की सजीव आनुवंशिकदृष्ट्या सुधारण्यासाठी तीन मूलभूत चरण आहेत —

(i) इच्छित जनुक असलेल्या DNA ची ओळख;

(ii) ओळखलेले DNA यजमानामध्ये सादर करणे;

(iii) यजमानामध्ये सादर केलेले DNA राखणे आणि DNA त्याच्या संततीमध्ये हस्तांतरित करणे.

11.2 पुनर्योगज DNA तंत्रज्ञानाची साधने

आता आपल्याला मागील चर्चेवरून कळते की आनुवंशिक अभियांत्रिकी किंवा पुनर्योगज DNA तंत्रज्ञान तेव्हाच साध्य करता येईल जेव्हा आपल्याकडे मुख्य साधने असतील, म्हणजे प्रतिबंधक एन्झाइम्स, पॉलिमरेज एन्झाइम्स, लायगेजेस, वेक्टर आणि यजमान सजीव. यापैकी काही तपशीलवार समजून घेण्याचा प्रयत्न करूया.

11.2.1 प्रतिबंधक एन्झाइम्स

1963 साली, एस्चेरिचिया कोलायमध्ये बॅक्टेरियोफेजची वाढ रोखण्यासाठी जबाबदार असलेली दोन एन्झाइम्स वेगळी केली गेली. यापैकी एकाने DNA मध्ये मिथाइल गट जोडले, तर दुसऱ्याने DNA कापले. नंतरच्याला प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएज असे म्हटले गेले.

पहिले प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएज–हिंद II, ज्याचे कार्य विशिष्ट DNA न्यूक्लियोटाइड क्रमावर अवलंबून होते, ते पाच वर्षांनंतर वेगळे केले गेले आणि त्याचे वैशिष्ट्यीकरण केले गेले. असे आढळून आले की हिंद II नेहमी DNA रेणूंना सहा बेस जोड्यांचा विशिष्ट क्रम ओळखून एका विशिष्ट बिंदूवर कापले. या विशिष्ट बेस क्रमाला हिंद II साठी ओळख क्रम म्हणून ओळखले जाते. हिंद II व्यतिरिक्त, आज आपल्याला 900 पेक्षा जास्त प्रतिबंधक एन्झाइम्स माहित आहेत जी 230 पेक्षा जास्त जीवाणूंच्या प्रजातींपासून वेगळ्या केल्या गेल्या आहेत आणि प्रत्येक भिन्न ओळख क्रम ओळखते.

या एन्झाइम्सना नाव देण्याची पद्धत अशी आहे की नावाचा पहिला अक्षर वंशापासून येतो आणि पुढील दोन अक्षरे प्रोकॅरियोटिक पेशीच्या प्रजातीपासून येतात ज्यामधून ती वेगळी केली गेली होती, उदा., EcoRI हे एस्चेरिचिया कोलाय RY 13 पासून येते. EcoRI मध्ये, ‘R’ हे अक्षर प्रजातीच्या नावापासून घेतले आहे. नावानंतरची रोमन संख्या दर्शवते की त्या जीवाणू प्रजातीपासून एन्झाइम्स कोणत्या क्रमाने वेगळी केली गेली.

प्रतिबंधक एन्झाइम्स न्यूक्लिएजेस नावाच्या मोठ्या वर्गाच्या एन्झाइम्सशी संबंधित आहेत. या दोन प्रकारच्या आहेत; एक्सोन्यूक्लिएजेस आणि एंडोन्यूक्लिएजेस. एक्सोन्यूक्लिएजेस DNA च्या टोकांपासून न्यूक्लियोटाइड्स काढून टाकतात तर एंडोन्यूक्लिएजेस DNA मध्ये विशिष्ट स्थानांवर काप करतात.

प्रत्येक प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएज DNA क्रमाची लांबी ‘तपासणी’ करून कार्य करते. एकदा तो त्याचा विशिष्ट ओळख क्रम शोधून काढल्यानंतर, तो DNA शी बंधनकारक होईल आणि दुहेरी हेलिक्सच्या दोन्ही साखळ्यांना त्यांच्या साखर-फॉस्फेट बॅकबोनमध्ये विशिष्ट बिंदूंवर कापेल (आकृती 11.1). प्रत्येक प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएज DNA मधील विशिष्ट पॅलिंड्रोमिक न्यूक्लियोटाइड क्रम ओळखते.

आकृती 11.1 प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएज एन्झाइम - EcoRI च्या क्रियेद्वारे पुनर्योगज DNA तयार होण्याची चरणे

तुम्हाला माहिती आहे का की पॅलिंड्रोम्स काय आहेत? हे अक्षरांचे गट आहेत जे पुढे आणि मागे दोन्ही दिशेने वाचल्यावर समान शब्द तयार करतात, उदा., “MALAYALAM”. शब्द-पॅलिंड्रोमच्या विरुद्ध जेथे दोन्ही दिशांनी समान शब्द वाचला जातो, DNA मधील पॅलिंड्रोम हा बेस जोड्यांचा एक क्रम आहे जो वाचनाची दिशा समान ठेवल्यास दोन्ही साखळ्यांवर समान वाचला जातो. उदाहरणार्थ, खालील क्रम 5’ $\rightarrow$ 3’ दिशेने दोन्ही साखळ्यांवर समान वाचला जातो. जर 3’ $\rightarrow$ 5’ दिशेने वाचला तर हे देखील खरे आहे.

$ \begin{aligned} 5^{\prime}—– \text { GAATTC }—– 3^{\prime} \\ 3^{\prime}—–\text { CTTAAG }—–5^{\prime} \end{aligned} $

प्रतिबंधक एन्झाइम्स DNA च्या साखळीला पॅलिंड्रोम साइट्सच्या केंद्रापासून थोडेसे दूर कापतात, परंतु विरुद्ध साखळ्यांवरील समान दोन बेस दरम्यान कापतात. यामुळे टोकांवर एक-साखळीचे भाग राहतात. प्रत्येक साखळीवर चिकट टोके म्हणून ओळखले जाणारे ओव्हरहॅंगिंग स्ट्रेचेस असतात (आकृती 11.1). त्यांना असे नाव दिले गेले आहे कारण ते त्यांच्या पूरक कापलेल्या समकक्षांशी हायड्रोजन बंध तयार करतात. या टोकांची चिकटपणा DNA लायगेज एन्झाइमची क्रिया सुलभ करते.

आनुवंशिक अभियांत्रिकीमध्ये प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएजेसचा वापर DNA चे ‘पुनर्योगज’ रेणू तयार करण्यासाठी केला जातो, जे वेगवेगळ्या स्त्रोत/जीनोममधील DNA पासून बनलेले असतात.

जेव्हा समान प्रतिबंधक एन्झाइमने कापले जाते, तेव्हा परिणामी DNA तुकड्यांमध्ये समान प्रकारची ‘चिकट-टोके’ असतात आणि, या DNA लायगेजेस वापरून एकत्र जोडल्या जाऊ शकतात (टोकापासून टोकापर्यंत) (आकृती 11.2).

आकृती 11.2 पुनर्योगज DNA तंत्रज्ञानाचे आकृतिबंध प्रतिनिधित्व

तुम्हाला कदाचित कळले असेल की सामान्यतः, जोपर्यंत वेक्टर आणि स्त्रोत DNA ला समान प्रतिबंधक एन्झाइमने कापले जात नाही, तोपर्यंत पुनर्योगज वेक्टर रेणू तयार होऊ शकत नाही.

DNA तुकड्यांचे वेगळे करणे आणि वेगळे करणे : प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लिएजेसद्वारे DNA कापल्याने DNA चे तुकडे होतात. हे तुकडे जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस म्हणून ओळखल्या जाणाऱ्या तंत्राद्वारे वेगळे केले जाऊ शकतात. DNA तुकडे ऋणात्मक प्रभारित रेणू असल्यामुळे त्यांना माध्यम/मॅट्रिक्सद्वारे विद्युत क्षेत्राखाली एनोडकडे जाण्यास भाग पाडून वेगळे केले जाऊ शकते. आजकाल सर्वात सामान्यपणे वापरले जाणारे मॅट्रिक्स म्हणजे अगरोज जे समुद्री वनस्पतींपासून काढलेला एक नैसर्गिक बहुवारीक आहे. DNA तुकडे अगरोज जेलद्वारे पुरवलेल्या छाननी प्रभावामुळे त्यांच्या आकारानुसार वेगळे (रिझॉल्व्ह) होतात. म्हणून, तुकड्याचा आकार जितका लहान असेल तितका तो दूर जातो. आकृती 11.3 पहा आणि अंदाज लावा की जेलच्या कोणत्या टोकाला नमुना लोड केला गेला होता.

आकृती 11.3 एक ठराविक अगरोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस ज्यामध्ये न पचवलेले (लेन 1) आणि पचवलेल्या DNA तुकड्यांचा संच (लेन 2 ते 4) स्थलांतरित होताना दाखवले आहे.

वेगळे केलेले DNA तुकडे केवळ DNA ला एथिडियम ब्रोमाइड नावाच्या संयुगाने रंगवल्यानंतर आणि UV किरणोत्सर्गाच्या संपर्कात आल्यानंतरच दृश्यमान होतात (तुम्ही शुद्ध DNA तुकडे दृश्यमान प्रकाशात आणि रंगवल्याशिवाय पाहू शकत नाही). तुम्ही UV प्रकाशात उघड केलेल्या एथिडियम ब्रोमाइडने रंगवलेल्या जेलमध्ये DNA चे तेजस्वी नारिंगी रंगाचे बँड पाहू शकता (आकृती 11.3). वेगळे केलेले DNA चे बँड अगरोज जेलमधून कापून काढले जातात आणि जेल तुकड्यातून काढले जातात. या चरणाला एल्यूशन असे म्हणतात. या प्रकारे शुद्ध केलेले DNA तुकडे क्लोनिंग वेक्टरसह जोडून पुनर्योगज DNA तयार करण्यासाठी वापरले जातात.

11.2.2 क्लोनिंग वेक्टर

तुम्हाला माहित आहे की प्लाझमिड आणि बॅक्टेरियोफेजमध्ये गुणसूत्रीय DNA च्या नियंत्रणापासून स्वतंत्रपणे जीवाणू पेशींमध्ये प्रतिकृती तयार करण्याची क्षमता असते. बॅक्टेरियोफेज प्रति पेशी त्यांच्या उच्च संख्येमुळे, जीवाणू पेशींमध्ये त्यांच्या जीनोमची अतिशय उच्च प्रत संख्या असते. काही प्लाझमिडमध्ये प्रति पेशी फक्त एक किंवा दोन प्रती असू शकतात तर इतरांमध्ये प्रति पेशी 15-100 प्रती असू शकतात. त्यांची संख्या आणखी वाढू शकते. जर आपण परकीय DNA तुकड्याला बॅक्टेरियोफेज किंवा प्लाझमिड DNA शी जोडू शकलो, तर आपण त्याची संख्या प्लाझमिड किंवा बॅक्टेरियोफेजच्या प्रत संख्येइतकी गुणाकार करू शकतो. सध्या वापरले जाणारे वेक्टर अशा प्रकारे अभियांत्रिकी केलेले आहेत की ते परकीय DNA ची सहज जोडणी आणि पुनर्योगज नसलेल्यांपासून पुनर्योगज निवडण्यास मदत करतात.

वेक्टरमध्ये क्लोनिंग सुलभ करण्यासाठी आवश्यक असलेली वैशिष्ट्ये खालीलप्रमाणे आहेत.

(i) प्रतिकृतीचा उगम (ori) : हा एक क्रम आहे जिथून प्रतिकृती सुरू होते आणि या क्रमाशी जोडलेला कोणताही DNA तुकडा यजमान पेशींमध्ये प्रतिकृती तयार करण्यासाठी बनवला जाऊ शकतो. हा क्रम जोडलेल्या DNA ची प्रत संख्या नियंत्रित करण्यासाठी देखील जबाबदार असतो. म्हणून, जर एखाद्याला लक्ष्य DNA च्या अनेक प्रती मिळवायच्या असतील तर ते अशा वेक्टरमध्ये क्लोन केले पाहिजे ज्याचा उगम उच्च प्रत संख्येसाठी समर्थन करतो.

(ii) निवडण्यायोग्य मार्कर : ‘ori’ व्यतिरिक्त, वेक्टरला निवडण्यायोग्य मार्करची आवश्यकता असते, जे नॉन-ट्रान्सफॉर्मंट्स ओळखण्यात आणि काढून टाकण्यात मदत करते आणि ट्रान्सफॉर्मंट्सची वाढ निवडकपणे परवानगी देते. ट्रान्सफॉर्मेशन ही एक प्रक्रिया आहे ज्याद्वारे DNA चा तुकडा यजमान जीवाणूमध्ये सादर केला जातो (तुम्ही पुढील विभागात प्रक्रियेचा अभ्यास कराल). सामान्यतः, अँपिसिलिन, क्लोरामफेनिकॉल, टेट्रासायक्लिन किंवा कॅनामायसिन इत्यादी प्रतिजैविकांना प्रतिरोधकता एन्कोड करणारी जनुके E. coli साठी उपयुक्त निवडण्यायोग्य मार्कर मानली जातात. सामान्य E. coli पेशींमध्ये यापैकी कोणत्याही प्रतिजैविकांविरुद्ध प्रतिकारशक्ती नसते.

आकृती 11.4 E. coli क्लोनिंग वेक्टर pBR322 प्रतिबंधक साइट्स (Hind III, EcoR I, BamH I, Sal I, Pvu II, Pst I, Cla I), ori आणि प्रतिजैविक प्रतिरोधक जनुके (ampR आणि tetR) दर्शवित आहे. rop प्लाझमिडच्या प्रतिकृतीमध्ये गुंतलेल्या प्रथिनांसाठी कोड करते.

(iii) क्लोनिंग साइट्स: परकीय DNA शी जोडण्यासाठी, वेक्टरमध्ये सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या प्रतिबंधक एन्झाइम्ससाठी अत्यंत कमी, शक्यतो एकच, ओळख साइट्स असणे आवश्यक आहे. वेक्टरमध्ये एकापेक्षा जास्त ओळख साइट्सची उपस्थिती अनेक तुकडे निर्माण करेल, जे जनुक क्लोनिंग गुंतागुंतीचे करेल (आकृती 11.4). परकीय DNA चे लिगेशन दोन प्रतिजैविक प्रतिरोधक जनुकांपैकी एकामध्ये असलेल्या प्रतिबंधक साइटवर केले जाते. उदाहरणार्थ, तुम्ही वेक्टर pBR322 मधील टेट्रासायक्लिन प्रतिरोधक जनुकाच्या BamH I साइटवर परकीय DNA जोडू शकता. पुनर्योगज प्लाझमिड परकीय DNA च्या समावेशामुळे टेट्रासायक्लिन प्रतिकार गमावतील परंतु ट्रान्सफॉर्मंट्सला टेट्रासायक्लिन असलेल्या माध्यमावर प्लेटिंग करून पुनर्योगज नसलेल्यांपासून निवडले जाऊ शकतात. अँपिसिलिन असलेल्या माध्यमावर वाढणारे ट्रान्सफॉर्मंट्स नंतर टेट्रासायक्लिन असलेल