ଜୈବ ପ୍ରଯୁକ୍ତି ନୀତି ଏବଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା#

ଜୈବ ପ୍ରଯୁକ୍ତିର ନୀତି#

ସଂଜ୍ଞା#

ଜୈବ ପ୍ରଯୁକ୍ତିରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ଉତ୍ପାଦ ଏବଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ବିକଶିତ କରିବା ପାଇଁ ସଜୀବ ଜୀବ କିମ୍ବା ସେମାନଙ୍କର ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟବହାର ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇଥାଏ।

ମୁଖ୍ୟ ଧାରଣା#

• ଜେନେଟିକ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ: ଏକ ଜୀବର ଡିଏନ୍ଏକୁ ଏହାର ବିଶେଷତା ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବା ପାଇଁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା।
• ରିକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଯୁକ୍ତି: ନୂତନ ଜେନେଟିକ ସଂଯୋଗ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସରୁ ଡିଏନ୍ଏକୁ ମିଶ୍ରଣ କରିବା।

ରିକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଯୁକ୍ତିର ସାଧନ#

1. ରିଷ୍ଟ୍ରିକ୍ସନ ଏନ୍ଜାଇମ୍#

• ସଂଜ୍ଞା: ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରମରେ, ଚିହ୍ନଟ ସ୍ଥାନ ଭାବରେ ଜଣାଶୁଣା, ଡିଏନ୍ଏକୁ କାଟିଥାଏ।
• କାର୍ଯ୍ୟ: ସେମାନେ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡ ସୃଷ୍ଟି କରନ୍ତି ଯାହା କ୍ଲୋନିଂ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ।
• ପ୍ରକାର:
  • ପ୍ରକାର I: ଅନିୟମିତ ସ୍ଥାନରେ ଡିଏନ୍ଏ କାଟନ୍ତି ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପାଇଁ ATP ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି।
  • ପ୍ରକାର II: ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥାନରେ ଡିଏନ୍ଏ କାଟନ୍ତି, ସାଧାରଣତଃ କ୍ଲୋନିଂରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
    • ଉଦାହରଣ: HindIII ଏକ ପ୍ରକାର II ରିଷ୍ଟ୍ରିକ୍ସନ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଯାହା ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ କ୍ରମ 5’-AAGCTT-3’ କୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ ଏବଂ A ଏବଂ G ମଧ୍ୟରେ କାଟିଥାଏ, ଲିସିଲା ଶେଷ ସୃଷ୍ଟି କରେ ଯାହା କ୍ଲୋନିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ସୁବିଧାଜନକ କରିପାରେ।

2. ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ କ୍ରମ#

• ସଂଜ୍ଞା: ଡିଏନ୍ଏରେ ଏକ ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ କ୍ରମ ହେଉଛି ଏକ କ୍ରମ ଯାହା ଗୋଟିଏ ସ୍ତରରେ 5’ରୁ 3’ ଦିଗରେ ସମାନ ପଢ଼େ ଏବଂ ପରିପୂରକ ସ୍ତରରେ 3’ରୁ 5’ ଦିଗରେ ସମାନ ପଢ଼େ।
• ଗୁରୁତ୍ୱ: ଅନେକ ରିଷ୍ଟ୍ରିକ୍ସନ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ କ୍ରମକୁ ଚିହ୍ନଟ କରନ୍ତି, ସେମାନଙ୍କୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥାନରେ ଡିଏନଏ ସହିତ ବନ୍ଧନ ଏବଂ କାଟିବା ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, HindIII ପାଇଁ ଚିହ୍ନଟ ସ୍ଥାନ (5’-AAGCTT-3’) ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ କାରଣ ବିପରୀତ ପରିପୂରକ (3’-TTCGA-5’) ବିପରୀତ ଦିଗରେ ସମାନ ପଢ଼େ।

3. ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ ଏବଂ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍#

• ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍: ଏହି ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଡିଏନ୍ଏ ସ୍ତର ମଧ୍ୟରେ ଫସ୍ଫୋଡାଇଏଷ୍ଟର ବନ୍ଧନ କାଟିଥାଏ। ବ୍ୟବହୃତ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ସେମାନେ କୋଣା କିମ୍ବା ଲିସିଲା ଶେଷ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରନ୍ତି।

  • ଉଦାହରଣ: HindIII ଏକ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ ଯାହା ଲିସିଲା ଶେଷ ଉତ୍ପାଦନ କରେ।

• ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍: ଏହି ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଗୁଡ଼ିକ ଏକ ଡିଏନ୍ଏ ଅଣୁର ଶେଷରୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ହଟାଇଥାଏ। ସେମାନେ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡ କାଟିବା କିମ୍ବା ଶେଷରୁ ଡିଏନ୍ଏ ବିଘଟନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରନ୍ତି।

  • ଉଦାହରଣ: ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ I ଏକସ୍ତରୀୟ ଡିଏନ୍ଏକୁ 3’ ଶେଷରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ଭାବରେ ବିଘଟନ କରେ।

4. ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡର ପୃଥକୀକରଣ ଏବଂ ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା#

• ପ୍ରଯୁକ୍ତି:
  • ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍: ଆକାର ଉପରେ ଆଧାର କରି ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବାର ଏକ ପଦ୍ଧତି। ଡିଏନ୍ଏକୁ ଏକ ଜେଲ୍ରେ ଲୋଡ୍ କରାଯାଏ ଏବଂ ଏକ ବିଦ୍ୟୁତ୍ ପ୍ରବାହ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଏ, ଯାହା ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେବାକୁ କାରଣ ହୁଏ।
  • ଶୁଦ୍ଧିକରଣ: ଆଗକୁ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଜେଲ୍ରୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କରିବା।

5. ଭେକ୍ଟରରେ କ୍ଲୋନିଂ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ବିଶେଷତା#

• ପ୍ରତିଲିପି ଉତ୍ପତ୍ତି: ହୋଷ୍ଟ ଭିତରେ ଭେକ୍ଟରକୁ ପ୍ରତିଲିପି କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ।
• ଚୟନ ଚିହ୍ନକ: ଜିନ୍ ଯାହା ପ୍ରତିଜୈବିକ ପ୍ରତିରୋଧ ପ୍ରଦାନ କରେ କିମ୍ବା ସଫଳ ରୂପାନ୍ତରିତକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଅନ୍ୟ ଚିହ୍ନକ।
• ଏକାଧିକ କ୍ଲୋନିଂ ସାଇଟ୍ (MCS): ବିଦେଶୀ ଡିଏନ୍ଏ ସନ୍ନିବେଶ ପାଇଁ ଅନେକ ରିଷ୍ଟ୍ରିକ୍ସନ ସାଇଟ୍ ଧାରଣ କରୁଥିବା ଏକ ଅଞ୍ଚଳ।

6. ସକ୍ଷମ ହୋଷ୍ଟ#

• ସଂଜ୍ଞା: ଏକ ହୋଷ୍ଟ କୋଷ ଯାହା ରୂପାନ୍ତରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ବିଦେଶୀ ଡିଏନ୍ଏ ଗ୍ରହଣ କରିପାରେ।
• ସକ୍ଷମ କୋଷ ସୃଷ୍ଟି ପଦ୍ଧତି:
  • ରାସାୟନିକ ଚିକିତ୍ସା (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, କ୍ୟାଲସିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍)।
  • ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋପୋରେସନ୍ (ପାରଗମ୍ୟତା ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ବିଦ୍ୟୁତ୍ କ୍ଷେତ୍ର ବ୍ୟବହାର)।

ରିକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଯୁକ୍ତିର ପ୍ରକ୍ରିୟା#

1. ଜେନେଟିକ ପଦାର୍ଥ (ଡିଏନ୍ଏ)ର ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା#

• ପଦ୍ଧତି:
  • କୋଷ ଭାଙ୍ଗିବା ପାଇଁ କୋଷ ଲାଇସିସ୍ ଏବଂ ଡିଏନ୍ଏ ମୁକ୍ତ କରିବା।
  • କୋଷୀୟ ଉପାଦାନ ପାଚନ କରିବା ପାଇଁ ଡିଟରଜେଣ୍ଟ ଏବଂ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ବ୍ୟବହାର।

2. ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥାନରେ ଡିଏନ୍ଏ କାଟିବା#

• ରିଷ୍ଟ୍ରିକ୍ସନ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ବ୍ୟବହାର: ଡିଏନ୍ଏକୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥାନରେ କାଟାଯାଏ ଯାହା ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରାଯାଇପାରିବ ଏହିପରି ଖଣ୍ଡ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ।

3. ହୋଷ୍ଟ କୋଷ/ଜୀବରେ ରିକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଡିଏନ୍ଏର ସନ୍ନିବେଶ#

• ରୂପାନ୍ତରଣ: ରିକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଡିଏନଏକୁ ସକ୍ଷମ ହୋଷ୍ଟ କୋଷରେ ପରିଚିତ କରାଇବା।
• ପଦ୍ଧତି:
  • ତାପ ଆଘାତ ପଦ୍ଧତି।
  • ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋପୋରେସନ୍।
  • ମାଇକ୍ରୋଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ (କୋଷରେ ସିଧାସଳଖ ଡିଏନ୍ଏ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍)।

4. ବିଦେଶୀ ଜିନ୍ ଉତ୍ପାଦ ପ୍ରାପ୍ତି#

• ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍: ସନ୍ନିବେଶିତ ଜିନ୍ରୁ ଇଚ୍ଛିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ହୋଷ୍ଟ କୋଷ (ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ, ଖମୀର, ଉଦ୍ଭିଦ, କିମ୍ବା ପ୍ରାଣୀ କୋଷ) ବ୍ୟବହାର।
• ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ମନିଟରିଂ: ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ୱେଷ୍ଟର୍ନ ବ୍ଲଟିଂ କିମ୍ବା ELISA ପରି ପ୍ରଯୁକ୍ତି।

5. ଡାଉନଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ#

• ଶୁଦ୍ଧିକରଣ: ହୋଷ୍ଟ କୋଷ ଏବଂ ଅନ୍ୟ କୋଷୀୟ ଉପାଦାନରୁ ଇଚ୍ଛିତ ଉତ୍ପାଦକୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କରିବା।
• ବର୍ଣ୍ଣନା: ଏହାର ଗଠନ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟ ପାଇଁ ଉତ୍ପାଦର ବିଶ୍ଳେଷଣ।
• ଫର୍ମୁଲେସନ୍: ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଉତ୍ପାଦ ପ୍ରସ୍ତୁତି।