فصل 10 پروتین انفورمیٹکس اور کیمیا انفورمیٹکس
10.1 پروتین کی معلومات
10.1.1 تعارف
انفورمیشن ٹیکنالوجی کی تکنیکوں کے ذریعے کسی بھی پروتین کے بارے میں معلومات ذخیرہ کرنا پروتین انفورمیٹکس کے تحت جاتا ہے۔ افتراضی پروتینز کی فعال سائٹ کی گہرائی کو حاصل کرنے میں، اور بائیوکیمیکل فنکشن اور بائیولاژیکل فنکشن کو حاصل کرنے میں پروتین انفورمیٹکس نے بہترین مدد کی ہے۔ اس کے علاوہ، اس نے مختلف افتراضی پروتینز کی تیسٹری کی ساخت کا قیاس کرنے میں مدد کی، جن کی جزیئی فنکشن کو طبیعی طریقوں سے نہیں سمجھا جا سکی تھا۔ ہیٹروجینس ڈیٹابیس اور پروٹیوم کے سکیم پر ایمینو اسیڈ کے سیکوینس، تیسٹری کی ساخت اور پیئیوی کا مختلف وضاحت کنندہ بھی پروتین انفورمیٹکس کی ترقی میں مددگار رہے ہیں۔
10.1.2 پروتین ڈیٹا کے اقسام
پروتین کی معلومات کی تشکیل کے عمل میں پروتین کے خام ڈیٹا کی ضرورت ہوتی ہے۔ یہ پروتین ڈیٹا مندرجہ ذیل اقسام میں ہو سکتی ہے:
(i) گرمی سے خراب ہونے والے پروتین آگریگیٹ کی مائیکروسکوپک تصویر
(ii) مذیبہ شکل میں پروتین
(iii) میٹرکس ایسسسٹڈ لیزر ڈیروڈیشن/آئونیزیشن (MALDI) کے نتیجے میں پروتین سیکوینس
(iv) جمع ہونے والی پروتین سیکوینس
(v) پروتین کرسٹل ساخت پروتین ڈیٹا بینک (PDB) فارمیٹ میں
(vi) پروتین-پروتین، پروتین-لائگنڈ یا پروتین-نیوکلیوٹائیڈ کے تعامل کی فائل
(vii) نیوکلر میگنیٹک رسوننس (NMR) ڈیٹا، میس پیکٹرومیٹری (MS) ڈیٹا
(viii) جینوم سیکوینس سے براہ راست منشأ ہونے والی پروتین سیکوینسز، جو معلوم مددگار دلائل کی موجودگی کو شامل نہیں کرتی (افتراضی پروتین)
اوپر ذکر کردہ پروتین ڈیٹا کے اقسام کو مفید معلومات حاصل کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، جیسے:
(i) گرمی سے خراب ہونے والے پروتین آگریگیٹ کی مائیکروسکوپک تصویر کی ملٹی فراکٹل خصوصیت پروتین-مارکر کی تخلیق کے لیے استعمال کی جاتی ہے۔
(ii) مذیبہ شکل میں پروتین ڈیٹا کو فزیکوکیمیکل خصوصیات اور کینیٹکس کی معلومات کا تجزیہ کرنے میں مددگار ہوتی ہے۔
(iii) MALDI سے منتقل ہونے والی پروتین کی جزوی چھوٹی سیکوینسز کو مکمل لمبائی کے سیکوینس کی تلاش میں استعمال کیا جاتا ہے۔
(iv) پروتین کرسٹل ساخت کو چھوٹی ہونے والی ہونے اور تعامل کے لیے سیکھنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔
(v) PDB، NMR اور MS ڈیٹا کو غیر کرسٹلائزڈ پروتین کی ساخت کی تخمینہ کرنے کے لیے بھی استعمال کیا جاتا ہے (براہ راست سیکوینس سے)۔
(vi) معلوم موجودگی کے بغیر (افتراضی پروتین کہلاتے) پروتینز کو جینوم سیکوینس سے شناخت کی جا سکتی ہے۔
(vii) پروتین کا نیٹ ورک میپنگ مختلف بیماریوں کے علاج کے ممکنہ ہدف کے بارے میں معلومات فراہم کرتا ہے۔
پروتین انفورمیٹکس کے تجزیے کے لیے، مندرجہ ذیل دو بنیادی فیسلٹیز کی ضرورت ہوتی ہے:
(i) مختلف ڈیٹابیسز سے خام ڈیٹا کی دستیابی، جیسے NCBI، PDB، CHEMBL، BIOMODELS، وغیرہ۔
(ii) تجزیہ کے لیے استعمال کی جانے والی انفورمیٹکس ٹولز اور تکنیکس۔ کچھ معروف تکنیکس مندرجہ ذیل ہیں: (أ) ویولٹ تکنیکس کے ذریعے تصویر کا تجزیہ، (ب) سیکوینس کی شبہت اور ہومولاوگی کے حسابات، (ج) ساخت کی بہتری کے لیے تکنیکس، (د) حسابی اور مشین لرننگ تکنیکس کے ذریعے ڈیٹا کا تجزیہ جیسے صنفی نیورل نیٹ ورک (ANN)، سپپورٹ ویکٹر مائین (SVM) اور چھپے ہوئے ہم آہنگی کا ماڈل (HMM)۔ (هـ) نیٹ ورک میپنگ تکنیک، اور (و) سسٹمز بائیولاژی مارک-اپ لنگویج (SBML)۔
10.1.3 پروتین ساخت کی حسابی تخمینہ
بائیوانفورمیٹکس ٹولز کے ذریعے پروتین ساخت کی تخمینہ کا مقصد یہ پھیلانا ہے کہ ایمینو اسیڈ سیکوینسز کیسے پروتین کی ساخت کو منتخب کرتی ہیں اور یہ پروتینز کیسے سبسٹریٹس اور دیگر جزیئات سے باہم تعلق بناتی ہیں تاکہ ان کی فنکشنز کر سکیں۔ اس کام میں پروتین کی ساخت کی تخمینہ کرنا (جنمیں افتراضی پروتینز بھی شامل ہوں) بائیوانفورمیٹکس ٹولز کے ذریعے ممکن ہے جب صرف جین سیکوینس معلوم ہو، یعنی پروتین سیکوینس کے غیر موجودہ حالت میں بھی۔ مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مختلف ذرائع سے مخت